071760 致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定盒(8種×10次)

　　一)整套試劑及用品

　　鑒定生化反應(yīng)的8種試劑(表1)、10瓶0.85%無(wú)菌生理鹽水、1瓶0.5 McFarland的濁度管、10支一次性吸管

　　二)生化管的使用方法

　　開(kāi)啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無(wú)菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)鋁蓋，撕開(kāi)鋁蓋，打開(kāi)西林瓶膠塞(如圖1)。

　　所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。

　　注意：氰化鉀生化管，應(yīng)盡量將塑帽套緊，以免氰化鉀揮發(fā)造成假陽(yáng)性!

　　三)致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法

　　致瀉大腸埃希氏菌僅是大腸埃希氏菌中的一小部分。挑取平板分離的可疑的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，將疑是致瀉大腸埃希氏

　　菌的新鮮菌苔置于已配備的無(wú)菌生理鹽水中，與0.5 McFarland的濁度管比濁，將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL )，用吸管吸取2滴(約0.06mL)菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞(如圖2左兩瓶所示)，特殊情況在下表注明采用半加塞(如圖2右兩瓶所示)，直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)(如圖2)，或放置于合適的瓶架中，于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見(jiàn)表1。

　　注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間或培養(yǎng)方式，請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)每種生化鑒定管附帶的使用說(shuō)明。

        　　三)致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定特征 (詳見(jiàn)下生化鑒定程序圖)　　

1. 致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定程序圖：

三）致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定特征 （詳見(jiàn)下生化鑒定程序圖）

　　注：“+” 陽(yáng)性; “—” 陰性<

　　2.血清學(xué)試驗(yàn)

　　假定試驗(yàn)：挑取經(jīng)生化試驗(yàn)證實(shí)為大腸埃希氏菌的瓊脂培養(yǎng)物，用腸道致病性大腸埃希氏菌、腸道侵襲性大腸埃希氏菌和產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌多價(jià)O血清和腸道出血性大腸埃希氏菌O157血清作玻片凝集。當(dāng)與某一種多價(jià)O血清凝集時(shí)，再與該多價(jià)血清所包含的單價(jià)O血清作試驗(yàn)。致瀉大腸埃希氏菌所包括的O抗原群見(jiàn)表2。如與某一個(gè)單價(jià)O血清呈現(xiàn)強(qiáng)凝集反應(yīng)，即為假定試驗(yàn)陽(yáng)性。

　　證實(shí)試驗(yàn)：制備O抗原懸液，稀釋至MacFarland 3號(hào)比濁管相當(dāng)?shù)臐舛取Ｔr(jià)為1：160～1：320的O血清，用0.5%鹽水稀釋至1：40。稀釋血清與抗原懸液再10mm×75mm試管中等量混合，做單管凝集試驗(yàn)。混勻后放于50℃水浴箱內(nèi)，經(jīng)16h后觀察結(jié)果。如出現(xiàn)凝集，可證實(shí)為該O抗原。